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細(xì)胞凍存的小Tips

更新時(shí)間:2024-09-23點(diǎn)擊次數(shù):1093

細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),直接影響細(xì)胞存活率和活力,關(guān)系到后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癜凑沼?jì)劃有效地進(jìn)行。掌握好細(xì)胞凍存的小Tips,有助您做好細(xì)胞培養(yǎng)式樣,讓我們一起來看看吧!

一、細(xì)胞凍存的基本原則

細(xì)胞凍存遵循“慢凍"原則:讓細(xì)胞在超低溫環(huán)境中緩慢進(jìn)入冬眠"狀態(tài),暫時(shí)停止其代謝活動(dòng)。目的是保存細(xì)胞樣本,方便復(fù)蘇。

二、細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)

1. 溫度控制不穩(wěn)定可能導(dǎo)致細(xì)胞存活率降低

二甲基亞砜(DMSO)或甘油作為冷凍保護(hù)劑,保護(hù)細(xì)胞DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,降低冰點(diǎn),延緩凍存過程,同時(shí)增加細(xì)胞膜的通透性,提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的

2. 使用程序降溫盒的注意事項(xiàng)

(1)異丙醇的量必須足夠,且使用5后需要更換,以確保凍存效果。而泡沫程序降溫盒需要在恢復(fù)到室溫后使用。對(duì)于短期的細(xì)胞凍存,可以考慮使用-80℃的超低溫冰箱。

(2)盡量選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存,此時(shí)的細(xì)胞匯合度應(yīng)達(dá)到80%以上。這樣可以大大提高細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率。對(duì)于嬌貴的細(xì)胞,我們可以通過適當(dāng)提高凍存液中血清的比例來保證獲得更高的存活率和細(xì)胞活力。

(3)細(xì)胞凍存密度不能太低,因?yàn)樵?/span>細(xì)胞凍存時(shí)會(huì)損失部分細(xì)胞,所以適當(dāng)提高細(xì)胞密度有助于提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率。

(4)細(xì)胞凍存液需要提前配制。在配制細(xì)胞凍存液時(shí)或直接使用商業(yè)的細(xì)胞凍存液,如wako的無血清細(xì)胞凍存液302-14681,由于DMSO溶解在培養(yǎng)基中會(huì)釋放大量熱量,因此細(xì)胞凍存液需要提前配制,切忌直接將DMSO加入含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中,以避免損傷細(xì)胞。

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