Elabscience總鐵結(jié)合力(TIBC)色法測試盒適用于檢測血清樣本中總鐵結(jié)合力。血清內(nèi)加入過量鐵，使血清中運(yùn)鐵蛋白全部與鐵結(jié)合，再加入鐵吸附劑將多余的鐵吸附掉，然后在酸性溶液和還原劑的作用下，使運(yùn)鐵蛋白中鐵與蛋白分離，使血清中高鐵還原成亞鐵，后者與雙吡啶結(jié)合成粉紅色絡(luò)合物，在一定范圍內(nèi)，鐵離子多少與色澤呈正相關(guān)，測得的鐵含量為TIBC，由TIBC減去血清鐵值，則稱為未飽和鐵結(jié)合力(UIBC)。

實(shí)驗關(guān)鍵點(diǎn)

① 沸水浴后離心，上清液必須澄清。

② 實(shí)驗器具一定要洗干凈，避免鐵離子污染。

③ 粉劑比較難溶解，需提前配制。

操作步驟

標(biāo)曲部分

① 標(biāo)準(zhǔn)孔：取 30 μL 不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，加入到對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)孔中。

② 向①中各孔加入 150 μL 鐵顯色劑。

③ 在酶標(biāo)儀上振板 5 s，覆膜室溫靜置 5 min，酶標(biāo)儀 520 nm 處，測定

各孔 OD 值。

樣本部分

待測樣本上清的制備:取 50μL血清，加入50μL的 10 mg/L 鐵標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液，渦旋混勻3s，室溫靜置5 min，再加入一支試劑五，渦旋混勻3 s，室溫靜置5 min 后，3000×g，離心10 min，取上清待測。

① 測定管：取 50μL待測樣本上清到1.5 mL EP 管中。

     對照管：取 50μL雙蒸水到1.5 mL EP 管中。

② 向①中各管加入250μL 鐵顯色劑，渦旋混勻3 s，沸水浴5 min。

③ 流水冷卻，10000×g，離心10 min。(若上清渾濁，取渾濁上清于新EP管中，再離心一次)

④ 取 180μL上清到板孔中，酶標(biāo)儀520 nm處，測定各孔OD值。

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