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免疫熒光實(shí)驗(yàn)的步驟有哪些?

更新時(shí)間:2023-10-18點(diǎn)擊次數(shù):1394

免疫熒光(IF)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)??捎糜跈z測(cè)和識(shí)別細(xì)胞和組織中蛋白質(zhì)及其他分子的亞細(xì)胞分布和遷移。那么你知道免疫熒光實(shí)驗(yàn)的步驟有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!

一、細(xì)胞準(zhǔn)備

對(duì)于單層生長(zhǎng)的細(xì)胞,將細(xì)胞接種到預(yù)先處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層后取出蓋玻片,用PBS洗滌兩次。

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞,用PBS離心洗滌(1000rpm, 5min)兩次,然后用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片。

二、固定

根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌﹣砉潭?xì)胞。

固定完畢后的細(xì)胞可置于含有疊氮納的PBS中,在4℃保存3個(gè)月。用PBS洗滌3次,每次洗滌5分鐘。

三、通透

對(duì)于使用交聯(lián)劑(如多聚甲醛)固定的細(xì)胞,一般需要在加入抗體之前進(jìn)行通透處理,以確??贵w能夠到達(dá)抗原部位。選擇通透劑時(shí)應(yīng)充分考慮抗原蛋白的性質(zhì)。通透時(shí)間一般在5-15分鐘。通透后用PBS洗滌3次,每次洗滌5分鐘。

四、封閉

使用封閉液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行封閉處理,時(shí)間一般為30分鐘。

五、一抗結(jié)合

在室溫孵育1小時(shí)或者在4℃過夜。用PBST洗滌3次,每次沖洗5分鐘。

六、二抗結(jié)合

對(duì)于間接免疫熒光,需要使用二抗。在室溫避光孵育1小時(shí)。用PBST洗滌3次,每次沖洗5分鐘,然后再用蒸餾水洗滌一次。

七、封片及檢測(cè)

滴加一滴封片劑,然后封片,最后使用熒光顯微鏡進(jìn)行檢查。

更多有關(guān)免疫熒光實(shí)驗(yàn)的步驟,請(qǐng)聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:


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